...来考察流速对于色谱柱和色谱分离的一些影响.(经证实,分离度提...
宾婕+张郴+陈建雯
摘 要：肝素是一种人工合成甜味剂，甜度大约是蔗糖的250倍，在20世纪初占有很大的市场，作为糖尿病患者的代糖。有研究表明，成人摄入20-40 g会头晕，恶心，低血压与发绀和高铁血红蛋白血症。世界上大部分国家（美国、日本、中国台湾、中国香港）均禁止食品中使用肝素。在我国，肝素不在卫生标准GB2760允许使用的甜味剂名单范围内。据文献报道，常在蜜饯食品中检验出肝素的存在[1]。本文考查三种不同特性的色谱柱对食品添加剂中的肝素的分离效果，以为肝素的检测提供依据。
关键词：不同特性色谱柱；肝素；分离效果
中图分类号：TQ464 文献标识码：A 文章编号：1671-2064（2017）17-0199-01
1 材料、试剂与仪器
1.1 材料与试剂
（1）材料。食品添加剂购于市场，肝素标准品：英国APOLLO -NMR公司。（2）试剂。乙腈（色谱纯，美国TEDIA天地试剂公司），水（自制超纯水）。
1.2 仪器
安捷伦LC1200高效液相色谱仪，配荧光检测器。色谱柱为Luna（2）C18（3.0um，150×4.6mm）；SunfireC18（5.0um，250×4.6mm）；Zorbax SB-C18（3.5um，250×4.6mm）。振荡发生器（国华电器有限公司，BS-S），电子天平（德国赛多利斯，CP-224S）。
2 实验方法
（1）样品制备。在所选的食品添加剂中均未检出肝素，为了达到实验的目的，本研究采用加标的方式制备样品，并进行实验。（2）样品前处理。称取约1.2g（精确至0.1mg）加标样品于锥形瓶中，按规定的方法进行萃取、纯化后，取适量溶液过0.45μm滤膜，备用。（3）高效液相色谱条件。以乙腈–缓冲盐为流动相，梯度洗脱：0-20min，乙腈12-23%，流速：1mL/min，柱温：35℃，进样量10uL，检测波长：λex/λem=239/312nm。（4）样品测定。取样品（1），用三种不同特性的色谱柱按规定色谱条件（3）进行测定，结果见图1。
实验结果表明，Luna（2）C18（3.0um，150×4.6mm）较其他两根色谱柱对食品添加剂中肝素而言，具有更好的分离效能。故用Luna（2）C18（3.0um，150×4.6mm）色谱柱进行方法学考查。
3 结果与讨论
（1）线性关系考察。分别准确移取0.1、0.3、0.5、1.0、2.0mL肝素对照品溶液至50mL容量瓶中，采用甲醇-缓冲液7：3溶液定容至刻度。高效液相色谱仪分析，测定其峰面积，以浓度X（ug/mL）为横坐标，色谱峰面积Y为纵坐标，绘制标准曲线。Y=1.4813X+0.0068，r=1。結果表明肝素标品浓度在0.1004～6.0420ug/mL范围内线性关系良好。（2）精密度试验。分别精密吸取肝素对照品溶液10μL，连续进样5次，记录色谱图，计算肝素的峰面积和相对标准偏差（RSD），结果RSD为0.47%。（3）稳定性试验。精密移取同一样品溶液2（2）10μL，分别于0，2，4，8，12h进样，记录色谱图，计算肝素的峰面积和相对标准偏差（RSD），结果RSD为1.08%。（4）重复性试验。取同一样品2（1）5份，精密称定，按2（2）项下方法处理，进样测定，计算肝素的峰面积和相对标准偏差（RSD），结果RSD为0.15%。（5）加标回收率试验。对食品添加剂2（1）进行不同浓度水平的加标后，按2（2）项下方法处理，计算其加标回收率，结果肝素的平均加标回收率为98.58%（RSD=1.12%）。
4 结语
Luna（2）C18（3.0um，150×4.6 mm）色谱柱对大量普适样品能获得满意的分离效果。操作方法简单，对操作人员无特殊技术要求，检测速度快，灵敏度高，准确度高，选择性好；无需购置昂贵的检测仪器，只需配备荧光检测器的液相色谱仪即可完成检测。
参考文献
[1]杨雪娇，付登洲，黄伟，等.高效液相色谱法测定蜜饯中的对乙氧基苯脲[J].食品工业，2009，（4）：68-70.
